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            Taq Plus DNA聚合酶(P1031-P1032-P1033-P1034)

            促销: 156.00~650.00

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            P1031(250U) P1032*(250U) P1033(1000U) P1034*(1000U)

            Taq Plus DNA聚合酶

            Cat. #P1031P1032P1033P1034

            产品简介

            Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶与Pfu DNA聚合酶的独特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍,扩增片段的长度可达20 kb(简单模板)。在扩增复杂模板(如GC-rich或重复序列)时,Taq Plus DNA聚合酶的扩增效率高于Taq DNA聚合酶,可用于复杂模板的PCR扩增。延伸速度为20s/kb70~75℃,简单模板可达5s/kb)。扩增产物具有两种末端:平末端与3'-dA

            产品组成

            Component

            P1031

            250U

            P1032

            250U

            P1033

            1,000U

            P1034

            1,000U

            Taq Plus DNA聚合酶(5U/μl[1]

            50 μl

            50 μl

            200 μl

            200 μl

            Taq Plus DNA聚合酶(2.5U/μl[1]

            100 μl

            100 μl

            400 μl

            400 μl

            10× Tpol BufferMg2+ Plus[1]

            1.25 ml

            1.25 ml

            1.25 ml × 4

            1.25 ml × 4

            6× Loading Buffer[2]

            1 ml

            1 ml

            1 ml

            1 ml

            dNTPs2.5mM[3]

            -

            1 ml

            -

            1 ml × 4

            [1] 提供5U/μl2.5U/μl两种活性单位的包装可供选择,如无特别说明默认5U/μl

            [2] 10× Tpol Buffer分为Mg2+ PlusMg2+ Free两种包装,可方便选择。如无特别说明提供10× Tpol BufferMg2+ Plus)。Mg2+ Free10× Tpol Buffer提供25 mM MgSO4。提供5U/μl2.5U/μl两种活性单位的包装可供选择,如无特别说明默认5U/μl

            [3] 6× Loading Buffer,如有需要可单独购买(Cat. #M9041)。

            [4] dNTPsdATPdGTPdCTPdTTP等摩尔混合物,P1011/P1013不含dNTPs,如有需要请单独购买(Cat. # P9011/P9012/P9013)。

            活性定义

            一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

            保存条件

            -20℃保存2年。

            质量控制

            纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

            功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

            应用举例

            1. 配制反应体系

            请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

            Ordinal

            Component

            Volume

            (50 μl reaction volume)

            Final   concentration

            (50 μl reaction volume)

            1

            10× Tpol BufferMg2+ Plus

            5 μl

            2

            dNTPs2.5mM

            4 μl

            0.4 mM

            3

            upstream primer (10 μM)[1]

            2 μl

            0.4 μM

            4

            downstream primer (10 μM)[1]

            2 μl

            0.4 μM

            5

            Taq Plus DNA聚合酶(5U/μl[2]

            0.5 μl

            2.5U

            6

            template DNA[3]

            1-4 μl

            <1μg

            7

            超纯水[4]

            To 50 μl

            -

            optional

            MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[6]

            Variable

            -

            [1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

            [2] 根据目的片段扩增的难易程度调整酶的用量。

            [3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。

            Template

            Dosage

            人类基因组DNA

            0.1μg-1μg

            λDNA

            0.5ng-5ng

            大肠杆菌基因组DNA

            10ng-100ng

            质粒DNA

            0.1ng-10ng

            [4] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

            [5] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

            2. 设定反应程序进行PCR反应

            Stage

            Temperature

            Time

            Number of Cycles

            Initial Denaturation

            94℃

            3 min

            1

            Denaturation

            94℃

            30 sec

            25-35

            Annealing

            55-68℃[1]

            30 sec

            Extension

            72℃

            Variable[2]

            Final Extension

            72℃

            5-10 min

            1

            [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

            [2] 延伸时间按20s/kb来设最佳(简单模板可达5s/kb)。

            3. 分析结果

            将产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

            无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

            操作注意事项

            1 室温下Taq Plus DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加Taq Plus DNA聚合酶或模板DNA

            2 Taq Plus DNA聚合酶的扩增产物有两种末端:平末端和3'-dA突出末端。如要进行TA克隆,请先进行加A反应,以提高克隆效率。(加A反应:参考如下体系,72℃15-30min

            PCR(纯化)产物

            1-7 μl

            10× Taq BufferMg2+ Plus

            1 μl

            dATP

            0.2 mM

            Taq DNA聚合酶

            5U

            超纯水

            To 10 μl

            引物设计注意事项

            引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

            相关产品

            名称

            货号

            规格

            PCR Mix

            P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

            1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

            Power Green qPCR Mix

            P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

            1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

            1kb ladder

            M1181/M1182

            50/250

            DSTM5000

            M1111/M1112

            60/300

            高纯度质粒小提试剂盒

            N1011/N1012/N1013

            50/100/200

            通用RNA提取试剂盒

            R1051

            50

            基因组DNA快速提取试剂盒

            N1111/N1112

            50/100

            DNA凝胶回收试剂盒

            N1071/N1072/N1073

            50/100/200

            RT-PCR Kit

            R1011/R1012

            20/100

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