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              1. 产品中心 > 常规PCR Mix系列 > PCR Mix(P2011-P2012-P2013-P2014-P2015)

                PCR Mix(P2011-P2012-P2013-P2014-P2015)

                促销: 156.00~5850.00

                分享

                运费 ¥0.00
                P2011(1 ml) P2012(5 ml) P2013(10ml) P2014(50ml) P2015(100ml)

                PCR Mix

                Cat. #P2011P2012P2013P2014P2015

                产品简介

                PCR Mix浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端,可直接用于TA克隆。

                Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达10 kb(简单模板)。延伸速度为1min/kb70-75℃,简单模板可达10s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。

                产品组成

                Component

                P2011

                P2012

                P2013

                P2014

                P2015

                2× PCR Mix

                1 ml

                1 ml× 5

                1 ml× 10

                1 ml× 50

                1 ml× 100

                超纯水

                1 ml

                1 ml× 5

                -

                -

                -

                本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

                保存条件

                -20℃保存2年。

                质量控制

                纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

                功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

                应用举例

                1. 配制反应体系

                请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

                Ordinal

                Component

                Volume

                (50 μl reaction volume)

                Final   concentration

                (50 μl reaction volume)

                1

                2× PCR Mix

                25   μl

                2

                upstream   primer (10 μM)[1]

                2 μl

                0.4   μM

                3

                downstream   primer (10 μM)[1]

                2 μl

                0.4   μM

                4

                template   DNA[2]

                1-4   μl

                <1μg

                5

                超纯水[3]

                To   50 μl

                -

                optional

                MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[4]

                Variable

                -

                [1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

                [2] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。

                Template

                人类基因组DNA

                λDNA

                大肠杆菌基因组DNA

                质粒DNA

                Dosage

                0.1μg-1μg

                0.5ng-5ng

                10ng-100ng

                0.1ng-10ng

                [3] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

                [4] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

                2. 设定反应程序进行PCR反应

                Stage  

                Temperature

                Time

                Number   of Cycles

                Initial   Denaturation

                94℃

                3   min

                1

                Denaturation

                94℃

                30   sec

                25-35  

                Annealing

                55-68℃[1]

                30   sec

                Extension

                72℃

                Variable[2]

                Final   Extension

                72℃

                5-10   min

                1

                [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

                [2] 延伸时间按1min/kb来设最佳(简单模板可达10s/kb)。

                3. 分析结果

                反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

                无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

                操作注意事项

                1 室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加模板DNA

                2 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

                3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5

                引物设计注意事项

                引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

                相关产品

                名称

                货号

                规格

                PCR Mix

                P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

                1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                Power Green qPCR Mix

                P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

                1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                1kb ladder

                M1181/M1182

                50/250

                DSTM5000

                M1111/M1112

                60/300

                高纯度质粒小提试剂盒

                N1011/N1012/N1013

                50/100/200

                通用RNA提取试剂盒

                R1051

                50

                基因组DNA快速提取试剂盒

                N1111/N1112

                50/100

                DNA凝胶回收试剂盒

                N1071/N1072/N1073

                50/100/200

                RT-PCR Kit

                R1011/R1012

                20/100

                更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。

                 

                 


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