球友会直播比分查询

  • <tr id='mq5sc'><strong id='mq5sc'></strong><small id='mq5sc'></small><button id='mq5sc'></button><li id='mq5sc'><noscript id='mq5sc'><big id='mq5sc'></big><dt id='mq5sc'></dt></noscript></li></tr><ol id='mq5sc'><option id='mq5sc'><table id='mq5sc'><blockquote id='mq5sc'><tbody id='mq5sc'></tbody></blockquote></table></option></ol><u id='mq5sc'></u><kbd id='mq5sc'><kbd id='mq5sc'></kbd></kbd>

    <code id='mq5sc'><strong id='mq5sc'></strong></code>

    <fieldset id='mq5sc'></fieldset>
          <span id='mq5sc'></span>

              <ins id='mq5sc'></ins>
              <acronym id='mq5sc'><em id='mq5sc'></em><td id='mq5sc'><div id='mq5sc'></div></td></acronym><address id='mq5sc'><big id='mq5sc'><big id='mq5sc'></big><legend id='mq5sc'></legend></big></address>

              <i id='mq5sc'><div id='mq5sc'><ins id='mq5sc'></ins></div></i>
              <i id='mq5sc'></i>
            1. <dl id='mq5sc'></dl>
              1. 产品中心 > 荧光定量PCR Mix > HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

                HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

                促销: 480.00~28800.00

                分享

                运费 ¥0.00
                P2201/1ml P2202/1ml×5 P2203/1ml×10 P2204/1ml×50 P2205/1ml×100

                HS Probe qPCR Mix

                Cat. #P2201P2202P2203P2204P2205

                产品简介

                HS Probe qPCR Mix用于探针法实时定量PCR2×浓缩预混液,使用时只需加入模板引物和探针即可进行反应。本品含有类抗体技术修饰的热启动酶Hotstart Taq DNA聚合酶配合东盛特制的Real Time PCR Buffer,不仅有效抑制引物二聚体和其他非特异性扩增,而且能够提高扩增效率,可以进行高灵敏度高特异性的PCR反应。本品在宽广的定量域内具有良好的线性关系,对靶基因定量准确、可信度高,重复性好。本品可搭配TaqMan等各类荧光探针使用,与常见定量PCR仪完美兼容,如ABIRocheBio-Rad等。

                产品组成

                Component

                P2201

                P2202

                P2203

                P2204

                P2205

                2× HS Probe qPCR Mixa

                1 ml

                1 ml×5

                1 ml×10

                1 ml×50

                1 ml×100

                超纯水

                1 ml

                1 ml×5

                -

                -

                -

                a 包含Hotstart Taq DNA聚合酶,AptamerdNTP及反应缓冲液等。

                保存条件

                HS Probe qPCR Mix -20℃保存2年,4℃可短期保存。

                质量控制

                纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

                功能检测:经不同来源的模板和引物检测,产品具有优秀的特异性、灵敏性及可重复性等。

                应用举例

                1. 配制反应体系

                请于冰上配制以下反应体系:

                Component

                Volume

                Final concentration

                DNA template[1]

                1-4 μl

                Variable

                Forward primer (10 μM)[2]

                0.4 μl

                0.2 μM

                Reverse primer (10 μM)[2]

                0.4 μl

                0.2 μM

                2× HS Probe qPCR Mix

                10 μl

                1×

                Probe (10 μM)[3]

                Variable

                0.1-0.5 μM

                ddH2O

                Variable

                -

                Total volume[4]

                20 μl

                -

                [1] DNA模板建议用量(20 μl体系):1-10 ng cDNA,或10-100 ng gDNA。加样体积不宜过小,以免造成较大的误差,但未稀释的cDNA不宜超过总体积的1/10。因此模板建议浓度(加样前):cDNA 1-10 ng/μlgDNA 10-100 ng/μl

                [2] 引物终浓度建议范围:0.1-1.0 μM, 通常引物终浓度为0.2 μM效果较好

                [3] 使用探针的浓度与Real Time PCR扩增仪、探针种类和荧光标记物种类有关,使用时请参照相关说明。通常探针终浓度在0.1-0.5 μM之间。

                [4] 建议总体积不小于10 μl,以免造成较大的加样误差。具体体积范围参考仪器说明。

                注意:对于某些固定型号的仪器,需要添加ROX才能精确测定Ct值。由于ROX的使用体积较小,建议将ROX提前与qPCR Mix混匀使用。ROX用量参照具体仪器说明,下表仅供参考。

                Instruments

                ROX (100X)

                ABI PRISM 7000/ PRISM 7700/ 7300/ 7900HT/ Step One/ Step One Plus/ GeneAmp 5700

                1-2% (High ROX)

                ABI 7500/ 7500 Fast/ ViiA 7/ QuantStudio 6/7/12K Flex; Agilent Stratagene Mx3000P/ Mx3005P/ Mx4000

                0.2% (Low ROX)

                Bio-Rad CFX96/ CFX384/ iQ/ iQ5; MJ Research Opticon 2/ Chromo 4; Roche LightCycler 480/ 96; Corbett Rotor Gene G/ Q/ 3000/ 6000; Thermo PikoReal 96; Eppendorf MasterCycler ep realplex; Cepheid Smart Cycler

                No ROX

                2. 设定反应程序进行qPCR反应

                步法程序示例如下:

                Stage

                Temperature

                Time

                Cycle

                Initial denaturation

                95

                3 min

                1

                Denaturation

                95

                10 sec

                40

                Annealing & Extension[1]

                60

                30 sec

                [1] 仪器在此阶段进行信号采集,请根据仪器类型设置。如需优化温度,建议在55-65范围内调整。

                若反应效果不佳,建议采用三步法扩增程序。

                经典三步法程序示例如下:

                Stage

                Temperature

                Time

                Cycle

                Initial denaturation

                95

                3 min

                1

                Denaturation

                95

                10 sec

                40

                Annealing[1]

                60

                15 sec

                Extension

                72

                20 sec

                [1]  仪器在此阶段进行信号采集常用退火温度在55-65℃之间。退火温度一般设定为所用引物的Tm-5℃,若低于55℃,则以Tm值为退火温度,一般不低于55℃请根据仪器类型设置反应时间。

                3. 分析结果

                观察扩增曲线;调整基线,计算Ct值;进行相对或绝对定量。

                注意事项

                 使用前Mix需要完全解冻,充分混匀。尽量避免多次反复冻融。短期使用可保存于4℃

                 将(n+x)份反应液混匀后再分注到n个单管中,可降低加样误差。(n为重复次数,x为损耗量,一般为n1/10

                ƒ ABI的定量仪器大部分需要ROX校正管间差异,Bio-Rad的定量仪器不需要ROX校正。具体仪器请参照其使用说明。

                 轻轻混匀反应液,避免产生气泡,气泡会干扰荧光检测。可瞬时离心去除气泡。

                 引物的特异性、用量以及退火温度是影响实验结果的重要因素。务必设计特异性好的引物,随实验结果适当调整引物用量(0.1 μM-1.0 μM——特异性较差时减少引物用量,或以3℃为增量提高退火温度,扩增效率较低时增加引物用量。

                 DNA模板的量应小于500 ng/反应,过高的模板量会引起非特异性扩增。应根据模板类型与基因表达量适当调整用量。

                 各类探针应参照相应的指南进行设计,并根据所用扩增仪类型、探针种类和荧光标记物种类等调整用量

                 

                相关产品

                名称

                货号

                规格

                PCR Mix

                P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

                1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                Power Green qPCR Mix

                P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

                1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

                1kb ladder

                M1181/M1182

                50/250

                DSTM5000

                M1111/M1112

                60/300

                高纯度质粒小提试剂盒

                N1011/N1012/N1013

                50/100/200

                通用RNA提取试剂盒

                R1051

                50

                基因组DNA快速提取试剂盒

                N1111/N1112

                50/100

                DNA凝胶回收试剂盒

                N1071/N1072/N1073

                50/100/200

                RT-PCR Kit

                R1011/R1012

                20/100

                更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。

                 


                姓名
                电话号码
                电子邮箱
                球友会直播比分查询名称
                地址
                留言*
                 
                验证码
                提交